產(chǎn)品描述
　　Western及IP裂解液是一種在非變性條件下裂解細(xì)胞的裂解液，對(duì)胞漿亞組分、胞核成分均有較強(qiáng)裂解作用，有利于胞漿蛋白、核蛋白、胞漿磷酸化蛋白及細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子的提取。適用于PAGE，Western，免疫沉淀(immunol precipitation，IP)和免疫共沉淀(co-IP)。
訂購(gòu)信息

產(chǎn)品組分

保存方法
　　裂解液4℃保存，其余-20℃保存，保質(zhì)期一年。
使用方法
1. 對(duì)于培養(yǎng)細(xì)胞樣品
(1) 融解Western及IP裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的終濃度為1 mM。
(2) 細(xì)胞裂解
對(duì)于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入100~200 μL裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞1~2 s后，細(xì)胞就會(huì)被裂解。
對(duì)于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入100~200 μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成50~100萬細(xì)胞/管，然后再裂解。大團(tuán)的細(xì)胞較難裂解充分，而少量的細(xì)胞由于裂解液容易和細(xì)胞充分接觸，相對(duì)比較容易裂解充分。具體Western/IP裂解液的使用量參照表1。
(3) 充分裂解后，10000~14000 rpm離心3~5 min，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
2. 對(duì)于組織樣品
(1) 把組織*切成細(xì)小的碎片；
(2) 融解Western及IP細(xì)胞裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的終濃度為1 mM。
(3) 按照每20 mg組織加入100~200 μL裂解液的比例加入裂解液，如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。具體Western/IP裂解液的使用量參照表1。
(4) 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。  
(5) 充分裂解后，10000~14000 rpm離心3~5 min，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
注意事項(xiàng)

2. 通常6孔板每孔細(xì)胞加入100 μL裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到150 μL或200 μL。
3. 如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過強(qiáng)烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便，不必使用勻漿器，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
表1： Western/IP細(xì)胞裂解液的使用量參考表

相關(guān)試劑推薦
EZ ECL化學(xué)發(fā)光液（貨號(hào)：AP34L024）
BCA蛋白定量試劑盒（貨號(hào)：AP12L025）